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73、重新开始 A549到 ...
A549到的那天,是8月9日。快递员把泡沫箱放在村口的小卖部,谢临昼签收时用的是“Lin Xizhao”那个假名。她抱着箱子走回仓库,脚步很快,但手很稳。泡沫箱不大,里面装着一支冻存管,管子上贴着标签:A549, P2, 2017-07-25。细胞在干冰中睡了两个星期,从欧洲到中国,从机场到村口,从泡沫箱到她的手里。她打开箱子,取出冻存管,检查了完整性。没有破损,没有泄漏,标签清晰。她把管子放进随身携带的液氮罐里,然后才开始拆箱的其余部分。说明书、质检报告、STR鉴定证书。一切正常。
她站在实验台前,手里攥着那支冻存管。管子是冰凉的,透过手套能感觉到那股寒意。这是她这一世第一次用自己的钱、自己的名字、自己的手买来的细胞。不是v2,不是学校提供的,不是沈既白送的。是她自己从欧洲订购的,用假名,用预付卡,用临时地址。没有人知道这批细胞的存在,没有人监控它的来源,没有人可以在它身上动手脚。它是干净的。
她戴上手套,打开自制的超净台,风机启动,气流稳定。她从液氮罐里取出冻存管,放进37度水浴锅中解冻。冰融化,水变凉,管子里的液体从固态变成液态。她用酒精擦拭管壁,喷了消毒剂,放进超净台。打开管盖,用移液器将细胞悬液轻轻转移到离心管里,加入预热的培养基,混合均匀。离心,弃上清,重悬,计数。活率百分之八十五,不算高,但够用。她把细胞铺进T25培养瓶里,放进培养箱。培养箱的温度稳定在37度,二氧化碳浓度5.0%,一切正常。
她关上培养箱的门,透过玻璃看着那瓶细胞。细胞还没有贴壁,悬浮在培养基里,像一层淡淡的雾。她知道,明天它们会沉下去,贴在瓶底,然后开始分裂。后天,它们会变成小圆点。大后天,会连成一片。一周后,她会传代。两周后,她会冻存。一个月后,她会开始筛选C3。进度很慢,但没有捷径。她不需要捷径,她只需要每一步都走稳。
林栖言站在她身后,看着培养箱。“贴壁了吗?”她问。“还没有。明天再看。”“我明天早点来。”谢临昼没有说“不用”,也没有说“好”。她只是继续记录。线圈本上,她写下了今天的日期、细胞批次、解冻时间、活率、铺板密度。每一个数字都写得工工整整。
第一周,她什么都没做出来。不是失败,而是太慢。A549解冻后适应了三天才开始正常分裂。传代时细胞密度不够,她又等了三天。冻存时存活率只有百分之七十,她又做了一批。一周过去了,她只完成了最基本的细胞维持——传代、换液、冻存。没有实验数据,没有阳性结果,没有任何可以写在纸上的进展。林栖言问她:“我们什么时候开始筛选C3?”她说:“等细胞稳定了。”林栖言没有再问。
第二周,她开始做基础实验。不是CDR,不是重编程,而是最基础的生长曲线。她要了解A549的增殖速度、饱和密度、接触抑制特性。这些数据在文献里都有,但她不相信文献。她只相信自己。她用了一周的时间,铺了六块96孔板,每天测一次细胞数量,画了一条生长曲线。曲线是S形的,第一天慢,第二天快,第三天饱和。和文献里的一样,但她自己测出来的,她才信。
第三周,她开始做药物敏感性测试。不是CDR因子,而是化疗药——顺铂。她要用顺铂验证A549的响应是否和文献一致。一致,说明细胞状态正常。不一致,说明细胞有问题。她用了五天时间,做了三块96孔板,测了IC50。结果是4.2微摩尔,和文献里的3.8-4.5一致。细胞正常,可以开始下一步了。
林栖言问她:“下一步是什么?”谢临昼说:“低氧。”
这是她的新路径。不是诱导,是信号。不是外力,是内力。低氧是钥匙,CDR因子只是放大器。她要先验证钥匙本身能不能开门。不需要CDR因子,只需要低氧。她买了低氧培养箱的配件——一个气体混合器,可以调节氧气浓度。不是新的,是二手的,从网上淘的。她花了半天时间安装调试,把培养箱的氧气浓度从21%降到5%。然后她把A549放进去,开始观察。
第一天,什么都没有。第二天,什么都没有。第三天,什么都没有。一周过去了,什么都没有。细胞形态不变,增殖速度不变,标志物表达不变。低氧没有开门。不是钥匙错了,是门不对。A549的门和HCC-827的门不一样。HCC-827在低氧下出现了二次分化,A549没有。细胞不同,反应不同。她需要换一把钥匙,或者换一扇门。
她坐在实验台前,看着培养箱里的细胞,沉默了很久。林栖言走过来,问:“失败了?”她摇头。“不是失败。是数据。低氧对A549没有显著影响。这是信息。”“那怎么办?”“换条件。不是换细胞,是换刺激。低氧不行,用低糖。低糖不行,用低血清。低血清不行,用药物。一个一个试。”
第四周,她开始试低糖。把培养基里的葡萄糖浓度从25mM降到5mM。一周,没有变化。降到2.5mM,细胞生长变慢,但形态不变。降到1mM,细胞停止分裂,但没有分化。低糖不行。
第五周,低血清。血清浓度从10%降到5%,细胞变慢,形态不变。降到2%,细胞变圆,但没有分化标志物。降到1%,细胞开始死亡。低血清不行。
第六周,药物。她用了一种已知的DNA去甲基化剂——5-氮杂胞苷。结果:细胞形态变了,但不是分化,是老化。细胞变大,变平,核质比降低,但没有表达终末分化标志物。不是她要的。
林栖言看着显微镜下的细胞,问:“这是成功吗?”谢临昼摇头。“不是。这是老化。老化不是分化。老化是终点,分化是过程。我们要的是过程,不是终点。”“那怎么办?”“换药物。不用去甲基化剂,用组蛋白去乙酰化酶抑制剂。”她买了曲古抑菌素A,和上一世用的一模一样。做了浓度梯度、时间梯度。一周后,结果出来了——阳性。不是分化,但出现了分化早期的标志物。细胞开始表达E-cadherin,一种上皮细胞标志物,在癌细胞中通常是下调的。E-cadherin上升,说明细胞正在从间充质表型向上皮表型转换。这不是终末分化,但这是方向。
她站在显微镜前,看着那些表达E-cadherin的细胞。绿色的荧光很弱,但清晰可见。她拿起线圈本,写下了一行字:“A549,低氧无效,低糖无效,低血清无效。HDAC抑制剂有效,诱导E-cadherin上调。不是分化,但方向一致。结论:钥匙存在,但不是低氧。需要继续试。”合上本子,锁进抽屉。
她转过身,看着林栖言。“没有捷径。我们只能继续试。试到找到钥匙为止。”林栖言点了点头。“我明天多配几批培养基。”
谢临昼走到培养箱前,打开门,取出A549的细胞板。细胞状态良好。她换了一次液,拿起记号笔,在板盖上写:“A549,第六周。没找到钥匙。但还在找。”她把板子放回培养箱,关上门。
她没有锁门离开,而是走到自制的超净台前,把用过的枪头盒收拾干净,把台面擦了一遍。酒精挥发得很快,台面干了。林栖言在整理耗材,周予衡在敲代码。三个人各做各的,但都在同一个房间里。窗外天已经暗了,她没有开灯,只有实验台上的台灯亮着,昏黄的光照在培养基的瓶子上。
她放下抹布,坐到折叠床边,没有躺下,只是坐着。双手放在膝盖上,掌心朝上。她看着自己的手,右手食指还是肿的。她把那只手握成拳头,疼了一下,松开。然后她站起来,走到窗前,推开窗户。夜风是暖的,带着夏天即将结束的气息。她站着,看了一会儿。没有深吸气,只是站着。然后她关上窗户,回到实验台前,把明天的实验计划在脑子里过了一遍。不是写在纸上,是记在脑子里。低氧不行,低糖不行,低血清不行,HDAC抑制剂有效但不完全。下一个试什么?TGF-β激活剂。她需要先查文献,确认浓度范围。明天的事,明天做。
她锁门,走进夜色。土路两边的玉米地已经收割了,只剩下光秃秃的秸秆。月光照在上面,泛着银白色的光。她没有停。
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作者公告
《白月光计划》 各位大大有机会可以阅读我的新作品。
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