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28、第一次成功 C0-7扩 ...
C0-7扩增到第五代的时候,谢临昼做了第一次CDR因子转导。她用了上一世验证过的条件:感染复数50,转导后48小时换液,72小时检测。结果在第三天下午出来。她站在显微镜前,调焦,视野里有大约三百个细胞。其中七个细胞变了——Ki67绿色荧光明显减弱,形态从圆形变成扁平,边缘伸出细长的突起。和上一世P73-LB的细胞一模一样。七个,占比不到百分之三。她把物镜从十倍切到四十倍,仔细观察那七个细胞的核质比。核变小,细胞质丰富,核仁从三个减少到一个。这是分化的特征,不是老化。
她直起身,没有兴奋,没有心跳加速。她只是从口袋里拿出线圈本,写:“C0-7,P5,CDR转导,72h。阳性细胞约7个,占比<3%。形态、荧光与P73-LB一致。”写完之后,她把板子放回培养箱,关上门。然后她坐在实验台前,盯着培养箱面板上跳动的数字。
她没有重复。不是不想,是不能。因为细胞不够。C0-7才扩增到第五代,总数不到一百万。做一次转导要用掉三分之一。她需要先扩增,扩增到足够数量,才能做重复验证。所以她继续传代,继续换液,继续等。每周传代两次,每次传代后细胞数翻倍。第八代,细胞总数到了三百万。她做了第二次转导。结果:阳性细胞十二个,占比约百分之四。比第一次略高,但数量还是太少。她做了第三次,第四次。阳性率始终在百分之三到百分之五之间波动,不稳定。不是技术问题,是细胞问题。C0-7对CDR因子的响应不是均一的,只有一小部分细胞敏感。敏感的那一小部分,转导后变成扁平细胞。不敏感的,还是圆形。
她在记录本上写:“C0-7对CDR因子响应不稳定,阳性率3-5%。可能原因:C0-7本身不是纯的敏感亚群,而是混合群体。需要进一步亚克隆。”她把这行字读了一遍,然后画了一条横线,横线下面写:“或者,培养条件不对。转导后细胞在标准培养基中无法存活,只有少数能撑过72小时。”她想到上一世P73-LB的细胞也是死了,不是因为重编程失败,是因为培养基不适合。癌细胞的标准培养基是RPMI,正常细胞需要更复杂的营养。她换了一种培养基——肺泡上皮细胞专用培养基,从一家小公司订购的,用假名。收到货那天,她配了一瓶,放在4℃冰箱里,瓶盖上贴了标签:“C0-7专用”。
第五次转导,她换了培养基。转导后48小时,她把RPMI换成肺泡上皮专用培养基。72小时检测,阳性细胞五十二个,占比百分之十八。比之前高了五倍。而且那五十二个细胞形态更扁平,突起更长,核质比更低。她在记录本上写:“换培养基后,阳性率从3-5%升至18%。提示培养条件对重编程后细胞存活至关重要。”
她没有告诉任何人。没有告诉傅迟序,没有告诉沈既白。不是不信任,是不需要。成功是自己的,不是别人的。她继续扩增C0-7,继续优化培养条件。换了三种培养基,试了五种添加剂。第七次转导的时候,阳性率稳定在了百分之二十。她把那二十个阳性细胞挑出来,单独培养,扩增。一个月后,她有了一个新的细胞系,她命名为C1。不是C0-7,是C1。C0-7是种子,C1是树。
她拿起记号笔,在C1的板盖上写:“C1,P1,2015.12.28。”写完之后,她正要放回培养箱,手机响了。不是电话,是短信。沈既白:“听说你成功了?”她回复:“听谁说的?”他没有再回复。
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作者公告
《林听有声舟向晚》 各位大大有机会可以阅读我的新作品。
……(全显)